Desthiobiotin-PEG4-CONH-Maleimide 是一種結(jié)合了脫硫生物素（Desthiobiotin）、聚乙二醇（PEG4）和馬來酰亞胺（Maleimide）的化合物，其核心功能是通過化學(xué)偶聯(lián)實(shí)現(xiàn)生物分子的標(biāo)記與純化。

1. 結(jié)構(gòu)解析

• 脫硫生物素（Desthiobiotin）：
  是生物素的類似物，與鏈霉親和素（Streptavidin）或親和素（Avidin）結(jié)合時(shí)，親和力低于生物素（解離常數(shù) $K_d\approx 10^{?11}\text{M}$，而生物素為 $10^{?15}\text{M}$）。這一特性使其可通過競(jìng)爭(zhēng)性置換（如添加游離生物素）在溫和條件下從結(jié)合復(fù)合物中洗脫，避免蛋白質(zhì)變性，適用于非變性純化場(chǎng)景。

• PEG4 linker：
  由4個(gè)乙二醇單元組成的聚乙二醇鏈，提供以下優(yōu)勢(shì)：

• 增強(qiáng)水溶性：減少疏水相互作用，提高化合物在緩沖液中的溶解度。

• 降低空間位阻：靈活的鏈結(jié)構(gòu)減少目標(biāo)分子間的立體阻礙，提升偶聯(lián)效率。

• 穩(wěn)定性提升：減少非特異性吸附，延長(zhǎng)試劑在溶液中的穩(wěn)定性。

• 馬來酰亞胺（Maleimide）：
  在中性pH（6.5-7.5）下特異性與巰基（-SH）反應(yīng)，形成穩(wěn)定的硫醚鍵。常用于標(biāo)記蛋白質(zhì)、抗體或核酸中的半胱氨酸殘基，實(shí)現(xiàn)靶向偶聯(lián)。

2. 核心功能

• 生物分子標(biāo)記：
  通過馬來酰亞胺與目標(biāo)分子（如抗體、酶）的巰基反應(yīng)，將脫硫生物素標(biāo)簽共價(jià)連接至分子表面。例如，標(biāo)記抗體后，可通過鏈霉親和素磁珠進(jìn)行親和純化。

• 溫和純化：
  標(biāo)記后的分子可通過脫硫生物素與鏈霉親和素的低親和力特性，在游離生物素競(jìng)爭(zhēng)下實(shí)現(xiàn)非變性洗脫，保留生物分子活性，適用于對(duì)變性敏感的蛋白質(zhì)或酶。

• 多功能應(yīng)用：

• 免疫分析：作為熒光標(biāo)記或酶標(biāo)記的中間體，用于免疫熒光、ELISA等檢測(cè)。

• 蛋白質(zhì)組學(xué)：標(biāo)記特定蛋白質(zhì)后進(jìn)行親和富集，結(jié)合質(zhì)譜分析。

• ADC（抗體偶聯(lián)藥物）開發(fā)：作為連接子（Linker），將毒素或熒光探針偶聯(lián)至抗體，實(shí)現(xiàn)靶向遞送。

3. 特點(diǎn)

• 高效偶聯(lián)：馬來酰亞胺與巰基的反應(yīng)快速且專一，確保標(biāo)記的高效性。

• 溫和洗脫：脫硫生物素設(shè)計(jì)避免高溫，保護(hù)生物分子功能。

• 靈活性：PEG4 linker長(zhǎng)度適中，平衡了水溶性與空間靈活性，適應(yīng)多種應(yīng)用場(chǎng)景。

• 生物相容性：所有組分均具有良好的生物相容性，適用于體內(nèi)或體外實(shí)驗(yàn)。

4. 典型應(yīng)用場(chǎng)景

• 蛋白質(zhì)純化：標(biāo)記重組蛋白后，通過鏈霉親和素柱純化，再用生物素洗脫。

• 表面等離子共振（SPR）：標(biāo)記配體分子，固定于傳感器芯片表面，研究分子間相互作用。

• 細(xì)胞成像：標(biāo)記熒光探針，通過鏈霉親和素-生物素系統(tǒng)實(shí)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)靶向成像。

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