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鏈霉親和素修飾PBS微球,PBS Particles-Streptavidin的介紹

2025-09-22 [194]

鏈霉親和素修飾PBS微球(通常指聚苯乙烯微球)是一種結(jié)合了鏈霉親和素高親和性與聚苯乙烯微球物理穩(wěn)定性的功能化材料,廣泛應(yīng)用于生物檢測、免疫分析、分子診斷及細(xì)胞分選等領(lǐng)域。

一、核心特性

  1. 高親和力結(jié)合
    鏈霉親和素(Streptavidin)與生物素(Biotin)的結(jié)合力較強(qiáng)(Kd≈10?1? M),且不受pH、溫度等因素干擾。這種特性使修飾后的微球能特異性捕獲生物素標(biāo)記的分子(如抗體、核酸、蛋白質(zhì)),實(shí)現(xiàn)高靈敏度檢測。

  2. 物理穩(wěn)定性
    聚苯乙烯(PS)微球具有良好的機(jī)械強(qiáng)度、化學(xué)穩(wěn)定性和生物相容性,表面光滑且均一性高,粒徑可控(通常100 nm–10 µm),滿足不同實(shí)驗(yàn)需求。

  3. 表面功能化
    微球表面可修飾羧基(-COOH)、氨基(-NH?)等官能團(tuán),通過化學(xué)交聯(lián)(如EDC/NHS活化)將鏈霉親和素穩(wěn)定偶聯(lián)于微球表面,保持其四聚體結(jié)構(gòu)與生物素結(jié)合能力。

  4. 多功能衍生化
    除鏈霉親和素外,微球表面還可共修飾熒光染料、磁性顆粒或親水分子,用于改善分散性、降低非特異吸附或增強(qiáng)信號讀出能力。

二、制備方法

  1. 微球合成
    通過乳液聚合或懸浮聚合制備聚苯乙烯微球,控制粒徑和表面特性(如羧基化處理)。

  2. 表面活化
    使用EDC/NHS等試劑活化微球表面羧基,形成活性酯中間體,為鏈霉親和素偶聯(lián)提供反應(yīng)位點(diǎn)。

  3. 鏈霉親和素偶聯(lián)
    將高純度鏈霉親和素溶液與活化微球混合,室溫反應(yīng)2小時,通過共價(jià)鍵固定于微球表面。

  4. 封閉與純化
    加入BSA或甘氨酸封閉未結(jié)合位點(diǎn),減少非特異性吸附;通過離心或透析去除游離鏈霉親和素,保存于4°C PBS緩沖液中。

三、應(yīng)用領(lǐng)域

  1. 免疫分析

    • ELISA改進(jìn):將鏈霉親和素修飾微球與生物素標(biāo)記抗體結(jié)合,用于檢測抗原,顯著提高靈敏度。

    • 側(cè)向?qū)游黾夹g(shù)(LFA):作為標(biāo)記物,實(shí)現(xiàn)快速診斷(如病原體檢測)。

  2. 分子診斷

    • 核酸分析:結(jié)合生物素化探針,實(shí)現(xiàn)PCR產(chǎn)物捕獲、基因序列檢測,適用于病原體檢測和基因突變分析。

    • 微陣列芯片:作為探針固定載體,用于高通量基因表達(dá)分析。

  3. 細(xì)胞分選與成像

    • 流式細(xì)胞術(shù):通過熒光信號和鏈霉親和素-生物素特異性結(jié)合,實(shí)現(xiàn)高精度細(xì)胞分選(如CD19+ CAR-T細(xì)胞分選純度>90%)。

    • 熒光顯微成像:標(biāo)記細(xì)胞表面抗原,觀察細(xì)胞形態(tài)、結(jié)構(gòu)及分子分布。

  4. 生物分離與純化

    • 親和層析:將鏈霉親和素固定于基質(zhì)上,與生物素標(biāo)記的目標(biāo)分子結(jié)合,實(shí)現(xiàn)特異性分離。

    • 磁分離:結(jié)合磁性顆粒,通過磁場快速分離目標(biāo)分子,提高分離效率。

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